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Devi Sbarazzarti Dei Problemi Di Risoluzione Dei Problemi Di PCr Gels

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Potresti imbatterti in un codice di errore che indica che i gel PCR verranno corretti. Esistono diversi modi per risolvere questo problema e le persone in tutto il mondo lo affronteranno a breve.Senza fronzoli e fronte gelido.Il campione non affonda davvero sul fondo del pozzo.Il campione esce nel pozzo.I nastri vengono distribuiti verticalmente.Ci sono troppi gruppi.Il gel cade in modo anomalo lentamente.Il gel funziona in modo atipico rapidamente.Bande proteiche troppo vicine tra loro (non completamente risolte)

Possibile può risultare in Raccomandazioni Preparazione del gel Gel denso
  • Quando si versa un gel di agarosio orizzontale, ricordarsi di mantenere lo spessore del gel a circa 3-4 mm. Durante l’elettroforesi, nello striptease di diffusione possono formarsi gel con qualsiasi tipo di spessore superiore a 5 millimetri.
Non ha funzionato sicuramente
  • Pulisci accuratamente il pettine dei gel per la pelle prima di versare il gel.
  • Per evitare che il fondo del campione fuoriesca spesso dal congelamento e, inoltre, imbrattando le strisce del campione, non spingere il pettine verso il basso è possibile fino al fondo del gel dell’assortimento.
  • Evita di riempire eccessivamente le nostre ciotole per il trattamento in quanto ciò potrebbe causare il blocco dei pozzetti.
  • Attendere che si formino le ammaccature e rimuovere preventivamente la capesante.
  • Una volta che il gel si è indurito, assenti con cura il pettine e fai sempre attenzione a non danneggiare le impronte.
tipo malato
  • Per l’elettroforesi di acidi grassi nucleici a filamento singolo legati (ad es. RNA), preparare un eventuale gel denaturante per una separazione efficiente. D’altra parte, evita di denaturare i gel che hanno campioni di DNA a doppio filamento.
Esempio di istruzione Campione non sopraffatto
  • Utilizzare quantità di campioni più che piuttosto grandi per completare l’elettroforesi; Tipicamente si consigliano da 0,1 a 0,2 μg per mm di profondità del pozzetto del gel. Strisce, strisce distorte e contro o forse a forma di U e battiti che sembrano fondersi sono una caratteristica comune adeguata associata a soluzioni traboccanti.
Campione rotto
  • Assicurarsi che alcuni reagenti debbano essere di qualità biologica molecolare e che siano probabilmente tipicamente privi di nucleasi nelle apparecchiature di laboratorio. Seguire le buone pratiche di laboratorio (ad es. indossare guanti di sicurezza, proteggere dalla contaminazione da nucleasi, duro lavoro in aree specifiche, ecc.) durante la finalizzazione di acidi, acidi nucleici, in particolare quando si lavora con l’RNA.
Campione di tamponi ad alto contenuto di sale
  • Fare infatti in modo che la concentrazione di sale nel tampone di ingresso sia compatibile con il gel specifico. Se necessario, assottigliare la barriera di carico.
  • Se il pool di rimedi nucleici si trova già in un’ostruzione di salinità superiore alla media, diluire il campione in uno stato normale privo di nucleasi prima di creare un buffer di caricamento. Se necessario, purificare per precipitare l’acido nucleico e risospendere un po’ di campione in acqua priva di nucleasi per eliminare più sale.
Campione ad alto contenuto proteico
  • Le proteine ​​presenti nel campione possono interferire risentendo dell’uso della fluidità del campione con il gel. Rimuovere la proteina purificando il test o dissociare per ogni denaturazione della proteina preparando il campione nell’SDS caricare i toni della pelle e riscaldarlo prima del caricamento.
Buffer di caricamento incompatibile
  • Per le sostanze chimiche nucleiche a filamento singolo collegate elettroforeticamente, utilizzare un veicolo denaturante del colorante, quindi riscaldare il campione per evitare la strutturazione duplex indesiderata.
  • Per l’elettroforesi del DNA a doppio filamento, la carica del colorante è una necessità sufficiente per la denaturazione e la mancanza di riscaldamento nell’esperimento per preservare la nostra struttura duplex.
Gellauf Bolle durante il caricamento del campione
  • Assicurarsi che le bolle d’aria presenti nel pozzo durante la degustazione su Internet non siano intrappolate, evitare distorsioni del frame del nastro.
Ben danneggiato per quanto riguarda l’avvio
  • Evitare di colpire i pozzetti dei puntali delle pipette durante il sollevamento del campione.
Il campione d’acqua contiene residui contenenti in aggiunta acrilammide, / o urea
  • Se si utilizzano paste di poliacrilammide, sciacquare eventuali residui di acrilammide (e urea purché i gel siano denaturati) provenienti dal pozzetto del campione per caricare il campione specifico.
Livello molto ridotto di alto, noto anche come corrente
  • Applicare la tensione consigliata per l’intervallo di altezza dell’acido nucleico specifico e il tampone di lavoro utilizzato. Latta a tensione molto bassa o alta Ciò porterà sicuramente a una risoluzione non ottimale durante la rottura degli acidi nucleici.
Evento controllato molto breve o lungo
  • Un gel da corsa a dura abbastanza a lungo da permettere alle cinghie di garanzia di allentarsi. Tuttavia, un funzionamento molto lungo può portare a surriscaldamento, campioni deformati e suoni sfocati.
Buffer di esecuzione incompatibile
  • Assicurati che la maggior parte dei gel e dei tamponi per suole siano compatibili e preparati correttamente.
  • Utilizzare l’elettroforesi funzionale ad alto buffer relativa a più di 2 ore.
Esempio di rendering Distribuzione di denaro di gruppo
  • Evitare la conservazione o un tempo considerevole tra il completamento dell’elettroforesi e in aggiunta la visualizzazione del gel; bande di dimensioni molecolari più piccole possono svilupparsi come calme, meglio è documentata la decolorazione dell’acido nucleico nel gel.
Corsie in movimento
  • Usa la corretta tensione del gel, il tasso di “commissione di transazione” e il lead timePer separare artisti che si esibiscono con dimensioni molecolari simili. Gli archi migratori appaiono spesso come un collo sfocato, enorme e leggero. Fotocamera
    • Essere
    nuvola Assicurati che la fotocamera sia perfettamente a fuoco quando il gelo è concettuale attraverso l’obiettivo per la visualizzazione sullo schermo.

Perché la mia lozione elettroforesi presenta striature?

1. Gel mal preparato: se il liquido non viene versato in modo sicuro, sicuramente non polimerizzerà o si indurirà in modo uniforme, provocando una vera sbavatura delle molecole. Se i pozzetti rimangono troppo pieni, o se il campione è stato necessariamente diluito male, la melodia in eccesso può benissimo imbrattare il gel.

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